珠联璧合——TBA与其他特异性检测方法联合

临床资料——————

1、患者48岁女性。主因“全身乏力2周，头晕、行走不稳伴交流障碍1周” 于 2020年1月9日收入院。

2、患者2周前无明显诱因出现全身乏力，经抗生素治疗后症状较前略好转。1周前，患者出现与体位无关的头晕，伴行走不稳，扣衣扣及穿鞋欠稳准，双眼上视时间断视物成双、不敢睁眼，饮水偶有呛咳、言语迟缓。上述症状逐渐加重，走路时双腿沉重、拖曳，头不自主地左右晃动，与家人交流时重复回答、自言自语，伴睡眠减少。

临床检查——————

1、既往史、个人史、婚育史及家族史无特殊。

2、神经系统查体：

（1）双眼不同轴，双眼外展、上视不能，双眼粗大水平及垂直眼震。

（2）四肢肌力Ⅴ级，肌张力减低，四肢腱反射活跃，双侧Rossolimo征阳性，双侧强握、摸索反射阳性。双侧 Babinski征、Chaddock征阳性。

（3）四肢及躯干深浅感觉正常。双侧指鼻试验、轮替试验、跟-膝-胫试验均欠稳准。头部不自主左右摇晃。

（4）Romberg征（+），步态不稳。脑膜刺激征阴性。

3、影像学：胸部CT、脑电图、头颅MRI增强及头颅MRA均未见异常。

实验室神经抗体筛查——————

1、细胞底物实验（CBA）方法（血清&脑脊液）——阴性

包括NMDAR、AMPA 1/2、DPPX、GABA_BR、LGI1、CASPR2、mGluR5、IgLON5、AQP4、MOG、Homer3、ATP酶亚基alpha-3、Rho GTP酶激活蛋白26及ITPR1。

2、免疫印迹法（血清&脑脊液）——阴性

包括Amphiphysin、CRMP5/CV2、Ma1、Ma2、Ri、Yo、Hu、Recoverin、SOX1、Titin、Zic4、GAD65、Tr（DNER）、PKCγ。

3、基于组织底物实验（TBA）方法（血清&脑脊液）——阳性

以大鼠海马及小脑组织为基质通过间接免疫荧光法筛查患者血清及脑脊液中潜在抗体。镜下见海马分子层神经毡荧光阳性，而海马颗粒细胞层无荧光（Ⓐ）。小脑浦肯野细胞胞膜及位于分子层树突荧光强阳性，呈“美杜莎头”或“流苏”状（Ⓑ）。

TBA检测结果呈阳性

4、实验室内部基于细胞底物实验（in house-CBA）——mGluR1-IgG阳性

根据TBA组织荧光表型，结合患者临床表现，特别是头部不自主晃动病史，考虑抗 mGluR1-IgG阳性可能性大。因此建立针对抗mGluR1-IgG的in house CBA检测体系。检测结果显示：患者入院首次血清及首次腰穿脑脊液抗mGluR1IgG阳性，滴度均为1∶1600。

in house-CBA验证mGluR1-IgG阳性

诊断与治疗——————

患者最终被确诊为mGluR1抗体相关性脑炎，免疫治疗13d后，患者口服甲泼尼龙片减至40 mg/d出院。

该患者前期进行了大量的自身免疫性脑炎、中枢脱髓鞘、副肿瘤综合征等抗体检测，结果均为阴性，后应用TBA才得到阳性结果，再根据TBA检测结果联合实验室内部CBA法检测出mGluR1抗体阳性。

在2017年版《中国自身免疫性脑炎诊治专家共识》中提到，自免脑确诊实验为：抗神经元表面抗原的自身抗体阳性；抗体检测主要采用间接免疫荧光法（IIF），根据抗原底物分为基于细胞底物的实验（cell based assay，CBA)与基于组织底物的实验（tissue based assay，TBA）两种。

联合TBA在神经系统自身免疫性疾病的实验室诊断中的应用，有助于与CBA相互验证和确认，还可检测因CBA /单特异性靶抗原法的抗体组合有限而导致的“漏诊”，同时也有助于新抗体发现的基础研究工作。

相关报道——————

1、近期北京协和医院神内的任海涛教授等发表的《Paraneoplastic cerebellar degeneration associated with anti-protein kinase Cgamma antibodies in a Chinese patient》中提到，其团队利用TBA检测出一例罕见的抗PKCγ抗体相关的副肿瘤小脑变性，迄今为止，全世界报道抗PKCγ抗体引起PCD的不超过5例。所以TBA在罕见抗体的检测上有明显的优势。

A、患者血清与鼠小脑组织切片的结合截面（TBA）-阳性

B、患者血清与PKCγ抗原的结合（CBA）-阳性

C、PKCγ抗原的免疫印迹试验（a.血清 b.脑脊液）—阳性

2、德国柏林卫生研究所对254名以往未找到病因的各种神经疾病儿童的脑脊液进行了回顾性分析，并通过TBA、CBA寻找对神经元表面抗原的反应性。结果通过TBA检测发现4%（10例）的患者存在不明的脑脊液神经反应性，表明存在不明的抗神经元自身抗体，CBA暂无法检测出。需要进一步的研究来识别靶抗原。

A：脑脊液与鼠脑组织荧光反应对比图（“0”阴性，信号强度在或低于阴性对照的背景荧光；“1”弱荧光 ，背景以上低信号；“2”介质荧光，明显阳性信号高于阴性对照，但低于阳性对照；“3”强荧光；等于或超过阳性对照的强信号。）

B：TBA检测出4%的患者存在脑脊液神经性反应（荧光强度均对应图A的2或3）

由于TBA能够筛选未知的自身抗体，德国柏林卫生研究所建议将TBA和CBA逐步相结合作为标准的诊断方法。

TBA联合其他特异性检测方法，如CBA、印迹法等，可提高检出符合率，减少漏诊。

  01   CBA或印迹法等的特异度更高，判读更易掌握，但往往其仅对应单一靶抗原，尽管基于临床需求及疾病特点推出多种抗体谱检测项目，仍然仅能覆盖有限的数种靶抗原。因此在临床表现不典型的情况下，选择检测某一类疾病的抗体谱会出现其他抗体漏检的情况，对临床医生的疾病诊断带来不便。

  02   TBA检测可提供更多的抗体线索，同时可对其他特异性检测方法的检测结果进行组织确认，从而对临床诊断提供更多更有效的信息。

  03   TBA中部分样本即使对于经验丰富的判读者来说，单从荧光模型也较难确认其特定的靶抗原，从而将抗原特异性确认方法（如CBA、印迹法等）纳入检测流程中，进行多种方法学联合检测，会为整体检测提供更多帮助。

海默医学是一家专注于神经医学的专业第三方特检实验室，一直坚持TBA和多种特异性检测技术联合应用，通过多组织基质（如小脑、海马等）联合检测，提高TBA报告抗体的判读特异性，积累了丰富的荧光模式判读经验，同时多种方法学的联合使用也大大提高了结果的准确性，海默医学可为临床常规提供CBA/免疫印迹法等+TBA联合检测。

参考文献：

1、刘磊, 刘建国, 张景晓, 等 . 抗代谢型谷氨酸受体1抗体相关性脑炎一例[J]. 中华神经科杂志, 2021, 54(9): 920-927. DOI: 10.3760/cma.j.cn 113694- 20210208- 00104.

2、Haitao Ren, Dachun Zhao et al.,Paraneoplastic cerebellar degeneration associated with anti-protein kinase Cgamma antibodies in a Chinese patient，Journal of Neuroimmunology 350 (2021)   577408.

3、Marc Nikolaus et al.,Presence of anti-neuronal antibodies in children with neurological disorders beyond encephalitis,1090-3798/© 2020 European Paediatric Neurology Society.